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詳述熒光分光光度計(jì)測(cè)試步驟
更新時(shí)間:2017-08-15   點(diǎn)擊次數(shù):2433次

詳述熒光分光光度計(jì)測(cè)試步驟

應(yīng)如何正確使用熒光分光光度計(jì)來(lái)進(jìn)行測(cè)試呢?以下將由上海旦鼎技術(shù)人員為您詳述:

熒光分光光度計(jì)詳細(xì)測(cè)試步驟

(一)樣品準(zhǔn)備

1.液體樣品根據(jù)用戶提供的技術(shù)指標(biāo),檢查濃度范圍是否合適,如果需要稀釋,則要考慮所需溶劑類型和稀釋倍數(shù)。

2.固體樣品均勻粉末、片狀或具有光滑平面的塊狀樣品,均可直接測(cè)定。

(二)操作步驟

1.開(kāi)機(jī):接通電源,打開(kāi)主機(jī)開(kāi)關(guān),點(diǎn)燃(打開(kāi))光源后,根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求啟動(dòng)計(jì)算機(jī)。

2.檢測(cè)前準(zhǔn)備:參照儀器說(shuō)明書(shū),在20天內(nèi)至少進(jìn)行一次激發(fā)校準(zhǔn)和發(fā)射校準(zhǔn),檢測(cè)前儀器應(yīng)預(yù)熱。

3.工作條件的選擇:環(huán)境溫度應(yīng)在20±5;相對(duì)濕度不大于70%;電源穩(wěn)定,無(wú)磁場(chǎng)、電場(chǎng)干擾。根據(jù)樣品的特性及熒光強(qiáng)度,選擇合適的儀器工作條件(如狹縫、PM增益、響應(yīng)時(shí)間等)。

4.基本測(cè)定

(1)熒光激發(fā)光譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù),掃描發(fā)射波長(zhǎng),找到maxλem,以此為發(fā)射波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度作為激發(fā)波長(zhǎng)的函數(shù),便得到激發(fā)光譜。

(2)熒光發(fā)射光譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù),掃描激發(fā)波長(zhǎng),找到maxλex,以此為激發(fā)波長(zhǎng),記錄發(fā)射強(qiáng)度與發(fā)射波長(zhǎng)間的函數(shù)關(guān)系,便得到熒光發(fā)射光譜。

(3)差譜測(cè)定

設(shè)置儀器參數(shù),選擇合適的工作方式,測(cè)定背景溶液的發(fā)射光譜并儲(chǔ)存起來(lái),在一定的工作方式下,掃描樣品溶液的發(fā)射波長(zhǎng),得到當(dāng)時(shí)的光度值和儲(chǔ)存的背景值之間的差示值,即差譜。

(4)峰面積積分

選擇適當(dāng)?shù)墓ぷ鞣绞?,?duì)樣品溶液進(jìn)行積分操作,即得到峰面積積分。

(5)熒光強(qiáng)度

選擇合適的測(cè)量參數(shù),設(shè)置λex、λem,采用定點(diǎn)讀數(shù)或掃描方式,即可測(cè)得所選波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度。

(6)定量測(cè)定

配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,在一定的測(cè)定條件下,設(shè)置λex、λem,按照由稀至濃的次序,測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制熒光強(qiáng)度—濃度的工作曲線,不改變儀器參數(shù)測(cè)定未知溶液的熒光強(qiáng)度,由工作曲線即可求出未知溶液的濃度。

(三)分析結(jié)果的表述

1.熒光激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及其他光譜由儀器控制電腦直接繪出。

2.峰面積積分、熒光強(qiáng)度由儀器控制電腦計(jì)算顯示。

3.定量測(cè)試:在相同的測(cè)定條件下,測(cè)定一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的熒光強(qiáng)度,繪制出熒光強(qiáng)度-濃度的工作曲線。濃度未知的溶液的熒光強(qiáng)度測(cè)定后,由工作曲線求出該溶液的濃度。 

熒光分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)

1.在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,應(yīng)提前打開(kāi)儀器預(yù)熱,并配制好所需的溶液,對(duì)于已經(jīng)配制好的溶液,在不用時(shí)放在4冰箱中保存,放置時(shí)間*過(guò)一星期的溶液要重新配制。

2.實(shí)驗(yàn)所用的樣品池是四面透光的石英池,拿取的時(shí)候用手指掐住池體的上角部,不能接觸到四個(gè)面,清洗樣品池后應(yīng)用擦鏡紙對(duì)其四個(gè)面進(jìn)行輕輕擦拭。

3.在測(cè)試樣品時(shí),注意熒光強(qiáng)度范圍的設(shè)定不要太高,以免測(cè)得的熒光強(qiáng)度*過(guò)儀器的測(cè)定上限。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,要及時(shí)的清理臺(tái)面,處理廢液,清洗和放置好樣品池,將下次要用的溶液放回冰箱,并且按規(guī)定登記實(shí)驗(yàn)記錄,養(yǎng)成良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。

通過(guò)以上介紹對(duì)于熒光分光光度計(jì)的測(cè)試步驟及使用注意事項(xiàng),您是否了解了呢?如有不明之處,歡迎隨時(shí)與我們!

 

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