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美國(guó)ABI Veriti 96 PCR儀操作方法
更新時(shí)間:2019-01-07   點(diǎn)擊次數(shù):2977次

PCR技術(shù)是一種分子生物學(xué)技術(shù),用于在幾個(gè)數(shù)量級(jí)上擴(kuò)展一段DNA的一個(gè)或幾個(gè)拷貝,復(fù)制數(shù)千到數(shù)百萬個(gè)DNA序列。作為一種廉價(jià)但可靠的方法,能夠重復(fù)復(fù)制DNA的聚焦片段。ABI公司的PCR儀器在行業(yè)內(nèi)受到普遍的歡迎。今天小編 Veriti 梯度PCR儀為例就為您簡(jiǎn)單介紹一下具體的操作方法。

步驟:

1、打開PCR儀的熱蓋,插入0.2ml的樣品管,蓋好熱蓋;

2、打開PCR儀的電源,儀器程序開始初始化,需等待幾分鐘;

3、初始化完成后,顯示主菜單;

4、點(diǎn)“Browse/New Methods”,進(jìn)入PCR程序列表;

5、可以直接點(diǎn)一個(gè)PCR程序,選擇“Start Run”運(yùn)行;點(diǎn)右邊的符號(hào),可以選擇不同的文件夾。如要新建一個(gè)PCR程序,點(diǎn)“New”,出現(xiàn)PCR程序;

6、添加一段程序:點(diǎn)中上方的“Stage”位置,該位置變紅;再點(diǎn)“Add”,軟件將加入一段新的程序;

7、修改循環(huán)數(shù)、溫度、時(shí)間:點(diǎn)中循環(huán)次數(shù)、溫度或時(shí)間位置,下方出現(xiàn)數(shù)字鍵。依次點(diǎn)數(shù)字鍵,出現(xiàn)合適數(shù)字后,點(diǎn)“Done”確定;

8、增加一個(gè)步驟:點(diǎn)“Step”位置,該位置變紅;再點(diǎn)“Add”,軟件將加入一個(gè)新的步驟;

9、刪除一個(gè)步驟:點(diǎn)“Step”位置,在點(diǎn)“Delete”,軟件將該步驟刪除;

10、建立梯度模式:點(diǎn)中一個(gè)步驟,再點(diǎn)“Option”鍵;

11、點(diǎn)“VeriFlex step”,出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口;

輸入6個(gè)梯度溫度,溫度下方的“1-2”是指對(duì)應(yīng)的1、2兩行加熱孔,全部輸好后,點(diǎn)“Done”確定。注意:相鄰的兩個(gè)梯度溫度之差較為大不能*過5℃!

12、建立漸變模式:

1)點(diǎn)中一個(gè)步驟,再點(diǎn)“Option”鍵;

2)點(diǎn)“Auto Delta”,出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口;

點(diǎn)“Staring Cycle”,輸入起始循環(huán)數(shù);點(diǎn)“Delta Temperature”,輸入溫度變化值;點(diǎn)“Delta Time”,輸入時(shí)間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR,可以提高PCR反應(yīng)的特異性。例:輸入起始循環(huán)數(shù)為2,溫度變化值為+0.5℃,時(shí)間變化值為+5s,則表示從第2個(gè)循環(huán)開始,每循環(huán)一次升溫0.5℃,時(shí)間增加5s。
13、增加暫停步驟:

1)點(diǎn)中一個(gè)步驟,再點(diǎn)“Option”鍵;

2點(diǎn)“Pause”;

輸入暫停的起始位置,暫停間隔和暫停時(shí)間,點(diǎn)“Done”確定。上圖表示每隔10個(gè)循環(huán)暫停10s,在10個(gè)循環(huán)的第1個(gè)循環(huán)之前暫停。

14、編輯PCR程序完成后,點(diǎn)“Save”保存;

點(diǎn)“Run Method”,輸入PCR程序名稱;點(diǎn),選擇保存PCR程序的文件夾(如果要保存在USB文件夾中,需要先插U盤)。再輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度(這兩項(xiàng)在運(yùn)行程序時(shí)可以修改)。點(diǎn)“SaveδExit”確定;
15、回到PCR程序列表界面,選擇新建的PCR程序;

16、點(diǎn)“Start Run”,出現(xiàn)運(yùn)行參數(shù)設(shè)置窗口;

17、儀器運(yùn)行選中的PCR程序,顯示運(yùn)行監(jiān)視窗口;

18、暫停運(yùn)行:
點(diǎn)“Pause Run”,儀器暫停,出現(xiàn)暫停選項(xiàng)欄;

“Remaining Time”顯示暫停剩余時(shí)間,“Elapse Time”顯示已暫停時(shí)間。
如果需要修改暫停時(shí)間,點(diǎn),輸入時(shí)間值,點(diǎn)“Done”確定;點(diǎn)“Resume Run”,結(jié)束暫停,繼續(xù)運(yùn)行PCR程序。
19、終止運(yùn)行:點(diǎn)“Stop”可以終止整個(gè)PCR程序;
20、反應(yīng)報(bào)告:
PCR程序結(jié)束后,儀器會(huì)自動(dòng)生成反應(yīng)報(bào)告,顯示當(dāng)次反應(yīng)的各項(xiàng)指數(shù)。該報(bào)告可以保存和打??;

21、PCR反應(yīng)結(jié)束后,打開熱蓋,取出樣品,關(guān)閉儀器電源。并開蓋放置,使熱蓋和加熱模塊正常降溫。

以上就是ABI VeritiPCR儀的操作步驟,希望對(duì)各位有所幫助。如果您有任疑問,歡迎您咨詢上海旦鼎,期待給您一個(gè)滿意的回復(fù)。

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