abi7500熒光定量pcr使用方法
Q:7500快速定量PCR儀可以使用0.2ml PCR反應(yīng)管或者96孔板嗎?
A:不可以，7500 快速定量PCR儀只支持0.1ml PCR反應(yīng)管或者96孔板
Q:如何監(jiān)控反應(yīng)體系是否有蒸發(fā)?
A:查看Rox信號(hào)是否在整個(gè)PCR過(guò)程中保持一致。在多組分圖譜界面，選擇單孔，如果Rox信號(hào)逐漸增高，代表樣品孔中有蒸發(fā)。如下圖所示:
Q:內(nèi)參基因與目標(biāo)基因是否需要在相同的反應(yīng)板上運(yùn)行相對(duì)定量?
A:是，內(nèi)參基因必須和目標(biāo)基因在相同的反應(yīng)板上。軟件可以根據(jù)在相同反應(yīng)板上的內(nèi)參基因和目標(biāo)基因自動(dòng)進(jìn)行相對(duì)定量計(jì)算，并計(jì)算估值區(qū)間。
Q:定量PCR系統(tǒng)支持的熒光染料有哪些?
A:下面是實(shí)時(shí)定量PCR儀器能夠檢測(cè)染料的表:
DYE | 7300 | 7500 | 7900 |
Cy3™ |
| X |
|
Cy5™ |
| X |
|
FAM™ | X | X | X |
JOE™ | X | X | X |
NED™ | X | X | X |
ROX™ | X | X | X |
SYBR® Green I | X | X | X |
TAMRA™ | X | X | X |
Texas Red® |
| X |
|
TET™ |
|
| X |
VIC® | X | X | X |
Q:用戶是否可以添加自定義染料?
A:可以，可以添加自定義染料，但染料的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)必須與儀器的濾光片設(shè)置兼容。
Q:常用熒光染料的發(fā)射波長(zhǎng)為多少?
A:
染料名稱 | 發(fā)射波長(zhǎng)(nm) |
FAM™ | ~520 |
SYBR® Green I | ~520 |
TET™ | ~540 |
JOE™ | ~550 |
VIC® | ~550 |
NED™ | ~580 |
CY3™ | ~580 |
TAMRA™ | ~580 |
ROX™ | ~610 |
Texas Red® | ~610 |
CY5™ | ~670 |
Q:ABI各種型號(hào)的定量PCR儀有什么特點(diǎn)?
A:
◆ 7300、7500、7500 快速系統(tǒng)是用鹵鎢燈作為激發(fā)光源，并利用濾光片檢測(cè)激發(fā)熒光
◆ 7300是一個(gè)激發(fā)光和四色濾光片
◆ 7500和7500快速有五個(gè)激發(fā)光和五個(gè)濾光片，所以可以檢測(cè)遠(yuǎn)紅外。
◆ 7900HT系統(tǒng)是用氬離子激光作為激發(fā)光源，可以掃描500nm -650nm所有波長(zhǎng)的熒光
◆ 7900HT系統(tǒng)可以提供更高通量，如 384孔板和低密度芯片升級(jí)，以及自動(dòng)手臂來(lái)裝載反應(yīng)板設(shè)備
Q:BHQ作為探針的淬滅基團(tuán)，在ABI定量PCR系統(tǒng)如何設(shè)定?
A:淬滅基團(tuán)設(shè)為none。
Q:7300/7500/7900HT定量PCR系統(tǒng)軟件生成的文件有哪些?
A:針對(duì)7300 v1.4及以下版本軟件，7500 v1.4 及以下版本軟件，7900HT軟件生成的文件，包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件，以 sds為文件后綴。相對(duì)定量分析產(chǎn)生以sdm為后綴文件，設(shè)置模板以 sdt為后綴。
針對(duì)7500 v2.0版本軟件，包含擴(kuò)增曲線的為數(shù)據(jù)文件，以 eds為文件后綴。相對(duì)定量分析產(chǎn)生以edm為后綴文件，設(shè)置模板以 edt為后綴。
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