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離心機(jī)提取乳酸脫氫酶及輔酶具體操作說明
更新時(shí)間:2012-08-24   點(diǎn)擊次數(shù):1937次

離心機(jī),想必很多人一聽到這個(gè)詞就知道這不就是實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備其中之一嘛。是的,說起離心機(jī),大家都會(huì)聯(lián)想到很多。臺(tái)式離心機(jī)可以應(yīng)用于乳酸脫氫酶及輔酶的提取。乳酸脫氫酶,是一種不需氧脫氫酶,以輔酶I(NAD﹢)為輔酶,催化乳酸與丙酮酸的可逆的氧化還原反應(yīng)。肌肉中含有大量的乳酸脫氫酶,在乳酸含量較高及氧氣充足情況下,催化乳酸生成丙酮酸,體外實(shí)驗(yàn)中,為觀察方便,在隔絕空氣后以甲烯藍(lán)作為受氫體,井用固定反應(yīng)中生成的丙酮酸,而使乳酸全部轉(zhuǎn)化為丙酮酸。今天我們對(duì)如何通過臺(tái)式離心機(jī)提取乳酸脫氫酶及輔酶I進(jìn)行介紹。

通過離心提取乳酸脫氫酶及輔酶用到的材料、試劑及設(shè)備有:(1)動(dòng)物后腿肌肉;(2)9g/LNaCl溶液;(3)活性炭;(4)10g/L乳酸鋰溶液;(5)5g/LKCN溶液;(6)乳缽;(7)臺(tái)式離心機(jī)等

具體操作方法:

1.輔酶I(NAD﹢)的制備:取動(dòng)物后腿肌肉2g置沸水浴中煮沸4—5分鐘(抑制酶的活力,防止將輔酶I破壞),取出冷卻、剪碎,加入少許9g/LNaCl溶液及細(xì)沙用乳缽研磨成糊狀,再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,利用臺(tái)式離心機(jī)進(jìn)行離心沉淀,收集上清液,儲(chǔ)冰箱備用。

2.乳酸脫氫酶酶蛋白的提取:取動(dòng)物后腿肌肉2g置乳缽中,加入少許9g/LNaCl溶液及細(xì)砂,仔細(xì)研磨后再加9g/LNaCl溶液8ml混勻,用雙層紗布過濾,濾液加活性炭0.5g振搖數(shù)分鐘后放置半小時(shí),并時(shí)常搖動(dòng),然后通過臺(tái)式離心機(jī)離心分離,取上清液備用。

看了以上的操作方法,你還可以自己試驗(yàn)一下,或者上海旦鼎貿(mào)易有限公司。:  我們將專業(yè)為您選購適合實(shí)驗(yàn)的離心機(jī)。

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